金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶多克隆抗体的制备及其交叉反应性研究矿

摘要：

目的:在原核载体中表达、纯化金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶,免疫小鼠获得多克隆抗体,使用多克隆抗体分析与其它菌种的交叉反应性. 方法:复苏pET28a-1dh/B121重组菌,IPTG诱导重组融合蛋白表达、以抗HIs标签单克隆抗体进行免疫印迹法鉴定重组蛋白.使用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测血清抗体效价,并使用小鼠抗血清进行western-blot鉴定重组蛋白的反应原性及其与金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌的交叉反应性. 结果:SDS-PAGE电泳在39KDa处可见目的条带,免疫印迹法验证了重组LDH的表达,纯化后获得2.8mg的重组蛋白.纯化蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,ELISA检测特异性IgG效价为1∶50000,western-blot鉴定显示所制备的多克隆抗血清能分别识别金黄色葡萄球菌重组及天然乳酸脱氢酶,但不识别表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌中天然乳酸脱氢酶. 结论:纯化的LDH具有良好的免疫活性,免疫小鼠获得高滴度的多克隆抗体.使用多克隆抗体western-blot显示与其它菌种LDH不存在交叉反应性,为后续使用该重组蛋白进行金黄色葡萄球菌感染的诊断研究奠定基础.

关键词： 金黄色葡萄球菌 乳酸脱氢酶 多克隆抗体 交叉反应性

作者: 梁秉绍 杨丽媛 董慧 李飞 黄艳梅 陈吟霜 谢永强 钟华敏 周珍文

作者单位: 广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心 广东 广州 510120

会议类型: 国内会议

会议名称: 第九届粤桂琼检验医学学术会议暨海南省医学会检验医学专业委员会2015年学术年会

会议地点: 海南陵水

会议语种:中文

页码: 235-240

在线出版日期: 2015-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）