斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽的cDNA克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
Hepcidin抗菌肽是由生物肝脏细胞表达的一类具有抗菌作用的碱性小分子肽,它们在机体免疫系统中发挥了重要作用,被认为是抗生素的理想替代品.不同来源的Hepcidin分子中均存在8个高度保守的半胱氨酸残基,它们与Hepcidin的抗菌活性有关.本文参考已经报道的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)hepcidin全长cDNA序列,通过RT-PCR首次从其肝脏中克隆了编码hepcidin原前体肽的基因”pIH”.该基因编码由72个氨基酸残基组成的原前体肽(prepro-peptide),其中包括47个残基的前体肽(propeptide)和25个残基的成熟肽(mature peptide),在其羧基端区域含有对于鱼类和哺乳类动物均显示高度保守的8个半胱氨酸残基.通过对上述编码hepcidin原前体肽的基因添加EcoR I和HindⅢ酶切位点,选择含”trx”融合头的pET-32a(+)作为表达质粒、E.coli BL21 (DE3)作为工程菌,成功构建了”pET-32a-pIH”原核表达系统.阳性克隆经1mM IPTG诱导、在37℃培养12h后,表达的”trxA-pIH”融合蛋白的70％以上是可溶的.Tricine-SDS-PAGE分析表明,细胞经超声破碎后的上清通过固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化后,获得了高纯度的目的蛋白.
hepcidin抗菌肽 制备工艺 互补脱氧核糖核酸 基因克隆 大肠杆菌 基因表达
赵冬梅
国内会议
上海
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194-200
2012-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）