重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的检测

摘要：

人组织纤溶酶原激活剂(ht-PA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品,应用转基因动物乳腺生物反应器制备已有报道,但重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)在转基因动物中表达尚未见报道.本研究设计了以人t-PA的F、E、K1区位点缺失体为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子,构建了乳腺特异性表达载体PCL25/rhPA,通过受精卵原核显微注射法制备转基因兔.用PCR检测及其产物测序筛选转基因兔,ELISA试剂盒及纤维蛋白平板溶圈法检测转基因兔的表达产物.试验获得原代转基因兔5只(2♂,3♀),其中2只乳腺中表达人重组纤溶酶原激活剂,rhPA浓度最高可达400μg/mL,表达产物比活性是现有阿替普酶的150～200倍.实验结果表明,重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)可以在山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子调控下获得乳腺特异性表达,表达重组蛋白具有较高的溶栓活性.

关键词： 血栓 人组织纤溶酶原激活剂 转基因生物反应器 特异性表达 溶栓活性

作者: 陆睿 宋绍征 祁正强 葛欣 邵宾 成勇

作者单位: 江苏省转基因动物制药工程研究中心,江苏省协同创新中心,江苏扬州225009

会议类型: 国内会议

会议名称: 2015年中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第九届会员代表大会暨第21次学术研讨会

会议地点: 昆明

会议语种:中文

页码: 517-526

在线出版日期: 2015-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）