猪霍乱沙门氏菌ΔcrpΔasd C78-1双缺失株的构建及鉴定
目的：旨在将已缺失crp基因的C78-1株进一步缺失asd基因,构建出猪霍乱沙门氏菌双基因缺失菌ΔcrpΔasdC78-1,并将其开发为适于黏膜免疫的疫苗活载体. 材料方法：首先从C78-1基因组中扩增出asd上下游片断asd1和asd2,分别连接到pMD 18-T载体上,测序正确后,依次克隆到质粒pBluescriptⅡSK(+)上,构建出转移质粒pSKasd1+asd2,然后用相应内切酶将asd1+asd2切下并克隆到自杀性质粒pRE112上,构建重组自杀性质粒pREΔasd,进而将该质粒导入大肠杆菌χ7213中;然后以ΔcrpC78-1为受体菌,以χ7213(pREΔasd)为供体菌进行接合转移,通过基因的等位交换技术,两步法筛选出ΔcrpΔasd双基因缺失的突变株,最后通过PCR及测序鉴定ΔcrpΔasdC78-1减毒株构建成功. 结果与结论：成功构建了AcrpAasdC78-1缺失株，该缺失株的生长必需外源的DAP（二氨基庚二酸）。本研究所构建的双缺失菌株AcrpAasdC78-1可以接受含asd基因的质粒，组建质粒平衡致死系统，该系统可用于高效表达外源基因，为开发以弱毒菌株AcrpC78-1为载体的口服多价苗奠定了基础。
猪霍乱沙门氏菌 双基因缺失株 菌株构建 基因鉴定
张明亮 张春杰 程相朝 田芳华 李小康 李静 赵战勤 龙塔
河南科技大学动物科技学院,洛阳,471003
国内会议
2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会
北京
中文
61-61
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）