绵羊透明质酸酶-2基因克隆载体的构建及生物信息学分析

摘要：

透明质酸酶(hyaluronidase)是能够水解组织细胞基质当中透明质酸的一种蛋白水解酶,可增加组织的通透性,促进皮下和局部组织的渗出液或血液的吸收.本试验为了构建绵羊Hyal-2基因体外克隆载体，并在测定Hyal-2基因序列基础上进行生物信息学分析，进一步了解Hyal-2的生物学功能及与肿瘤发生之间的关系。根据Genebank中登录的Hyal-2的基因序列，设计两对引物，并分别在前段上游和后段下游引物57端引入HindⅢ酶切位点和BamHI酶切位点，以健康绵羊胎盘组织提取RNA后反转录产物cDNA为扩增Hyal-2基因的模板，进行分段PCR扩增。以扩增的两段产物为共同模板运用Overlapping PCR技术扩增全长Hyal-2基因。将经双酶切并纯化之后的目的片段连接于克隆载体PMD19-T上，转化感受态细胞DH5a，之后以菌液PCR方法鉴定为阳性的菌液扩大培养后，以质粒小提试剂盒提取质粒，进行单、双酶切鉴定和序列测定，确定成功构建了Hyal-2基因克隆载体，并将测定的基因序列进行生物信息学分析。本试验结果可为Hyal-2的分子生物学与分子病理学相关研究提供实验材料，对迸一步分析研究Hyal-2基因的功能提供基础性工作。

关键词： 绵羊 透明质酸酶-2 基因克隆载体 生物信息学

作者: 么宏强 张月梅 朱福余 于立新 马学恩

作者单位: 内蒙古农业大学兽医学院,内蒙古呼和浩特市010018;农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,内蒙古呼和浩特市010018 内蒙古农业大学兽医学院,内蒙古呼和浩特市010018

会议类型: 国内会议

会议名称: 2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 80-80

在线出版日期: 2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）