蒙古绵羊绒毛膜滋养层细胞的体外培养与鉴定
为了体外获得高纯度的绵羊绒毛膜滋养层细胞，为后续的细胞转染和RNA干扰试验提供细胞基础。本试验经过培养不同孕期（早、中、晚）蒙古绵羊滋养层细胞，通过分析胎盘的采集时间对细胞的贴壁率及细胞活性的影响，确定采集胎盘的最佳时期为孕中期。通过添加不同浓度的血清，筛选出含15％胎牛血清的DMEM培养体系较好，细胞形态及生物特性保持不变，细胞生长速度及增殖能力无明显差异。采用组织块法培养滋养层细胞，消化差速法纯化细胞，纯化后的细胞经H.E染色，观察到细胞呈多角形或卵圆形，细胞界限清晰，胞浆透明，核圆形或呈小泡状。免疫组织化学方法分别检测不同孕期正常绵羊胎盘绒毛组织，以及来源于绒毛组织的体外培养的滋养层细胞，结果显示细胞角蛋白染色呈阳性反应，波形蛋白染色呈阴性反应，表明细胞性质为上皮来源的绒毛膜滋养层细胞，且纯度达90%以上，符合后续的实验要求。透射电子显微镜观察体外培养的滋养层细胞．结果显示所培养细胞膜外有微绒毛，胞质内有丰富的线粒体、游离核糖体和多聚核蛋白体，高尔基复合体明显，位居核旁，核大，核内异染色质分散，胞质内还可见电子密度高的脂滴和膜包颗粒等滋养层细胞的典型结构。RT-PCR技术检测到体外培养的滋养层细胞能表达该细胞所分泌的特有的滋养层蛋白-1基因片段。证实该方法可以有效获得较高纯度的、具有生物学活性的绵羊绒毛膜滋养层细胞，为本实验室后续的体外研究提供试验基础。
绵羊 滋养层细胞 体外培养 分子鉴定
刘慧 张宇飞 孙晓林 刘淑英
内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018 内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018;农业部动物临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特,010018
国内会议
2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会
北京
中文
81-81
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）