绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的原核表达
为了获得特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的多克隆抗体.利用DNAStar-Protean软件分析绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的氨基酸序列,预测其囊膜蛋白线性B淋巴细胞优势抗原表位,在线分析囊膜基因原核表达稀有密码子,根据分析结果选取囊膜蛋白的两段基因分别表达,命名为env-1和env-2.为了获得特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的多克隆抗体。利用DNAStar-Protean软件分析绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的氨基酸序列，预测其囊膜蛋白线性B淋巴细胞优势抗原表位，在线分析囊膜基因原核表达稀有密码子，根据分析结果选取囊膜蛋白的两段基因分别表达，命名为env-1和env-2。以本实验室构建好的pCDNA3.1-exjSRV-env质粒为模板设计引物，通过PCR技术扩增，利用5min快速T-A克隆技术将PCR扩增片段克隆入pEASY-E2原核表达载体中，构建pEASY-E2-env-l和pEASY-E2-env-2重组原核表达质粒，将质粒转化入Ttransl克隆菌中，经酶切、PCR及DNA测序鉴定后，利用pEASY-E2载体上的的NdeⅠ和XohⅠ两个酶切位点将env-l和env-2片段从载体中切下来，并与同样经过Nde I和Xoh I酶切过的pET30a载体连接，构建pET30a-env-1、p ET30a-env-2重组原核表达质粒，经酶切、PCR及DNA测序鉴定后，将pEASY-E2-env-1、pEASY-E2-env-2、pET30a-env-1、pET30a-env-2阳性质粒转化入TransB(DE3)表达菌中。在OD值为0.5时加入IPTG，在IPTG终浓度为0.5mM、ImM、2mM和4mM，于30℃分别诱导表达4h、6h和8h。表达产物经超声破碎，用SDS-PAGE分析鉴定。结果表明，pET3a-env-l转化的重组表达菌随着IPTG浓度的增加表达量增加，表达产物主要以可溶性形式存在，表达的目标蛋白表观分子量约为18KD，与预计蛋白分子量相符。pEASY-E2-env-1、pEASY-E2-env-2、pET30a-env-2重组表达菌的没有目标蛋白的表达。本研究为下一步利用重组蛋白研制绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株的多克隆抗体及诊断方法奠定基础。
绵羊 肺腺瘤病毒 囊膜蛋白 基因克隆 原核表达
刘月 张宇飞 张亚坤 孙晓林 刘淑英
内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018 农业部动物临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特,010018
国内会议
2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会
北京
中文
85-85
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）