pcDNA3.1(+)/exJSRV-env重组质粒的构建及其瞬时转染293T细胞
绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料，提取总RNA并反转录为cDNA，以此cDNA为模板，F-env，R-env1，R-env2为引物，利用半巢式PCR扩增目的基因，胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA3.1(+)均用kpnl和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA3.1(+)/exjSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确，将其瞬时转染293T细胞后，裂解细胞并提取总RNA，利用RT-PCR技术，琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp，与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA3.1(+)/exjSRV-env真核表达质粒构建成功，并能在293T细胞内表达。
绵羊 肺腺瘤病毒 重组质粒 瞬时转染 293T细胞
张宇飞 刘月 张亚坤 孙晓林 刘淑英
内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018 农业部动物临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特,010018
国内会议
2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会
北京
中文
90-90
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）