鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析
本试验通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5,对其纯化并进行特性分析.根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列,并将其定向克隆至原核表达载体pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-NS5,经双酶切鉴定及测序正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,获得NS5蛋白大肠杆菌表达株.经IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白最终经SDS-PAGE及western-blotting鉴定.结果显示,NS5融合蛋白分子质量约为120 kDa,在诱导后5h达到表达量高峰,融合蛋白以包涵体形式存在,western-blotting显示原核表达的蛋白可被鹅坦布苏病毒抗兔血清特异性识别,以NS5蛋白为抗原制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性.这些都为进一步开展关于鹅坦布苏病毒NS5蛋白的研究奠定了基础.
鹅坦布苏病毒 NS5非结构蛋白 原核表达 基因测序
韩凯凯 李银 黄欣梅 赵冬敏 刘宇卓 刘青涛 谢星星 安凤娇
江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京,210014
国内会议
济南
中文
186-188
2015-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）