应用Talen法制备apoE基因敲除大鼠模型
目的:应用Talen法制备apoE基因敲除大鼠模型,为进一步研究apoE基因功能,动脉粥样硬化疾病发病机制及治疗方法奠定基础. 方法:设计并合成针对大鼠apoE基因的Talen序列,应用原核显微注射方法制备子代鼠.通过PCR-测序及TA克隆-测序法检测仔鼠中apoE的突变,经传代及兄妹交配获得纯合型仔鼠,并对基因型进行鉴定.应用western blot方法检测apoE-/-仔鼠ApoE蛋白表达水平;血清学分析血脂总胆固醇及甘油三酯含量;应用RT-PCR方法检测脂质代谢相关基因ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的表达. 结果:经鉴定选取在第二外显子处缺失1bp,造成开放阅读框移码突变的大鼠为阳性F0代仔鼠,该鼠经传代获得子代鼠,并进行纯合子筛选,最终获得apoE-/-大鼠.Westernblot检测显示apoE-/-鼠在心、肝、肾、脑、卵巢组织中未见ApoE蛋白的表达,表明在该模型中成功实现了apoE基因的敲除.apoE-/-鼠血脂总胆固醇、甘油三酯均高于野生SD大鼠,其中总胆固醇水平呈现显著性差异(P＜0.05).在apoE-/-鼠肝组织中ABCA1的表达降低,可能起到促进AS形成的作用. 结论:应用Talen法成功制备apoE基因敲除SD大鼠;经筛选获得了纯合型apoE-/-大鼠,该模型实现了apoE基因敲除,并表现为高血脂及动脉粥样硬化状.
动脉粥样硬化 发病机制 载脂蛋白E 基因敲除
徐影琪 杨葳 周生来 于洋 王惟 张梅英 郑志红
中国医科大学实验动物部 110001
国内会议
沈阳
中文
49-55
2015-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）