截短鸭RIG-Ⅰ蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
目的:制备抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,鉴定其免疫学特性并建立分析检测体系. 方法:利用PCR技术将鸭RIG-Ⅰ基因helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到pET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒pET30a-c和pET30a-d;通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白;将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(mAb);采用ELISA、Western blot和IFA对单克隆抗体进行鉴定分析. 结果:获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体15株,14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性. 结论:制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础.
鸭 单克隆抗体 维甲酸诱导基因Ⅰ蛋白 原核表达 免疫学特性
孟庆文 臧凤霞 张雅春 王伟 赵颖慧 李越 周长良 陈洪岩
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 150001
国内会议
沈阳
中文
281-285
2015-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）