巨细胞病毒重组抗原的制备纯化及鉴
目的:应用生物信息学技术对人类巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分子进行抗原表位预测,构建并表达具有多表位的重组融合蛋白并进行免疫原性鉴定. 方法:GenBank中查询HCMV氨基酸序列,利用BepiPred、ABCpred、BcePred、PREDICTED四种在线表位预测软件进行细胞表位预测,筛选出可能的抗原决定簇表位,构建、原核表达,并利用免疫印迹实验筛选出可用的表位抗原,原核表达出融合蛋白,用Western Blot和ELISA检测其抗原性. 结果:综合预测分析结果,得出13种可能的表位,构建出pET32a原核表达载体,表达并纯化这13种表位的融合蛋白,经免疫印迹技术筛选出gp52、GB3、PP150-1、GB-5具有较强的抗原性表位,通过Ni2+亲和柱纯化,对gp52融合蛋白免疫印迹试验结果表明,蛋白抗原性较强;ELISA法鉴定具有较高的抗原性及特异性. 结论:在原核表达系统中能获得高效表达,纯化的融合蛋白具有较强的免疫反应性,对后期建立人HCMV免疫检测试剂提供了可能性.
巨细胞病毒抗原 表位预测技术 蛋白纯化 结构鉴定 免疫反应性
王良梅 李智洋 许红攀 夏艳艳 庞露 司进
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2015-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）