枯草芽孢杆菌高产过氧化氢酶的条件优化及酶学性质研究
过氧化氢酶是食品、纺织和美容业广泛应用的工业酶制剂.本文对工程中心选育获得的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)过氧化氢酶进行了研究.通过单因子实验确定EIM-70产过氧化氢酶的最适碳、氮源,采用Plackett-Burman实验设计筛选出对产酶影响显著的因子.再利用最陡爬坡实验和响应面分析法确定最适产酶培养基配方,优化后Bacillus subitilis EIM-70的液体发酵产过氧化氢酶的活力可达6927.45U/mL,比优化前提高1.87倍.发酵所获得的过氧化氢酶粗酶液经过硫酸铵梯度盐析、Q Sepharose FastFlow离子交换层析和Sephacryl S-200 High Resolution凝胶层析，获得纯化过氧化氢酶，纯化倍数是3.58倍，回收率是8.41％。SDS-PAGE银染结果为单一条带，相对分子质量约为64.2KDa。酶学性质研究表明:酶最适温度为35℃，在20-40℃范围内相对活力在70%以上;酶作用最适pH值是6.0，在pH4-10范围内催化活性在60%以上。以过氧化氢为底物测定该酶的Km值为37.15mmol/L,Vm值为24.33L*min/mmol;Zn2+、Mg2+、Al3+、Ba2+和乙醇+氯仿对过氧化氢酶活力影响不大;而Mn2+和Ca2+对过氧化氢酶活力有不同程度的抑制;Fe3+对该酶有一定的激活作用;而NaN3,KCN和EDTA强烈抑制该酶的活力，揭示纯化得到的是一种血红素过氧化氢酶。
枯草芽孢杆菌 过氧化氢酶 发酵参数 酶学性质
杨鹤 柯崇榕 蔡少丽 吴松刚 黄建忠
工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心(福建师范大学)
国内会议
华东六省一市生物化学与分子生物学学会2014年学术交流大会暨浙江省第十一届学会会员代表大会
浙江温州
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22-22
2014-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）