家蚕组织中异柠檬酸脱氢酶的原核表达及其乙酰化的研究
本实验旨在通过对家蚕组织的异柠檬酸脱氢酶的乙酰化修饰,观察乙酰化对家蚕组织的异柠檬酸脱氢酶功能(酶活性)的影响. 根据提供的家蚕异柠檬酸脱氢酶(IDH)的mRNA，设计引物，第一个基因的引物序列为P1:CCCAAGCTTATGTCTAAAATAAAGGCTGG，P2：CGCGGATCCTCATTGTCCTAGAGCAAC，第二个基因的引物序列为P1ATAAGAATGCGGCCGCATGGCTAATAC，P2：CGCGGATCCTTATTTGCCGCCCAAC，PCR以后回收，载体选择的是PET-28a，经过双酶切，回收后利用T4连接酶16℃进行连接，后经过转化感受态细胞，表达蛋白，制作抗体，随后进行乙酰化位点的改变，进行Western blot观察是否调控成功，然后进行免疫共沉淀，测酶的活性。结果，通过原核表达，乙酰化位点的改变，测定的酶活发生了变化。说明乙酰化对家蚕单个蛋白的功能变化有很大的联系，对后续的家蚕其他蛋白的乙酰化调控有很重要的指导意义。
家蚕 异柠檬酸脱氢酶 原核表达 乙酰化作用
程旭升 聂作明 盛清
浙江理工大学生命科学学院,杭州310018
国内会议
华东六省一市生物化学与分子生物学学会2014年学术交流大会暨浙江省第十一届学会会员代表大会
浙江温州
中文
48-48
2014-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）