人类ES及iPS体外诱导成内耳毛细胞的研究

摘要：

将人类的H9 ES及本实验室建立的iPS细胞消化分散，以合适密度接种到铺有Laminin的细胞培养皿中，用含有FGF3,FGF 10生长因子的分化培养基进行诱导分化，培养10-12天后得到听觉前体细胞，细胞免疫荧光实验表明其表达听毛细胞前体细胞的标志蛋白PAX2,PAXS。第二步采用胎肝、3T3-L1,MC-3T3,OP9,HePG2,u251六种细胞的条件培养液诱导前体细胞分化为毛细胞，用毛细胞特异的标志蛋白Myosin7A, Brn3c细胞免疫荧光检测，结果表明六种细胞条件培养液对诱导生成毛细胞的能力依次为MC-3T3＞HepG2＞OP9＞U251、胎肝、3T3-L1。其中，MC-3T3细胞条件培养液诱导分化结果表明91.6％的细胞呈Brn3c阳性，33.3%细胞呈现Myosin7A阳性，而且Myosin7A阳性的细胞只出现在BRN3C阳性的细胞上。该方法高效简便、毛细胞的分离纯化也比较方便。这为进行后续线粒体12SrRNAA1555G突变导致组织特异性耳聋的分子机理研究及开展毛细胞移植治疗耳聋建立了可靠的技术体系。

关键词： 耳聋 内耳毛细胞 诱导性多能干细胞 胚胎干细胞 体外诱导

作者: 孟飞龙 李福山 管敏鑫 赵小立

作者单位: 浙江大学生命科学学院 310058

会议类型: 国内会议

会议名称: 华东六省一市生物化学与分子生物学学会2014年学术交流大会暨浙江省第十一届学会会员代表大会

会议地点: 浙江温州

会议语种:中文

页码: 72-72

在线出版日期: 2014-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）