会议专题

一种快速检测水稻细菌性谷枯病菌活菌的方法

目的:水稻细菌性谷枯病,是一种种传病害,目前已蔓延至东南亚、拉丁美洲及非洲的十多个国家和地区,我国大陆地区目前尚未证实有该病害发生,2007年水稻细菌性谷枯病被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》.目前针对该病菌检测的快速检测方法均建立在传统分离生化鉴定和常规PCR和实时荧光PCR的分子检测方法基础之上,传统生化鉴定费时费力,分子生物学鉴定无法做到对活水稻细菌性谷枯病菌的鉴定.因此建立一种快速筛选检测水稻细菌性谷枯病菌活菌的方法,对该病害的快速检疫和防治具有重要意义.方法:试验采用国际上不同地区和不同时间发生的水稻细菌性谷枯病菌标准菌株制备水稻细菌性谷枯病菌特异性免疫抗体,抗体纯化后结合在MACS微型磁珠(MACS MicroBeads)免疫磁珠上制备成结合有水稻细菌性谷枯病菌抗体的特异性检测磁珠,利用该磁珠能特异性捕获水稻细菌性谷枯病菌并且具有磁性吸附的原理,用制备的特异性免疫磁珠与待测样本提取或浸泡液的浓缩液混合,捕获水稻种子和水稻材料提取浓缩液中的水稻细菌性谷枯病菌,在磁铁吸附磁珠的条件下将未结合的其他菌体洗去后制备成纯水稻细菌性谷枯病菌菌液,进行该方法的特异性和灵敏度分析。结果:制备的免疫磁珠能够特异性地捕获待测样品中的水稻细菌性谷枯病菌,通过染色观察可明显地将水稻细菌性谷枯病菌的活、死进行区分,通过对该方法的灵敏度进行研究试验结果表明该方法能有效地从含有100cfu/L水稻细菌性谷枯病菌活菌的液体中对该菌进行检测,在2h内就可检测出样本中的水稻细菌性谷枯病菌活菌。结论:使用免疫磁珠捕获结合cFDASE/PI荧光染色技术解决了常规鉴定和分子生物学鉴定不能快速检测活细菌的不足,该方法可特异性地、快速检测样本中的水稻细菌性谷枯病菌,适用于对水稻材料和环境中的水稻细菌性谷枯病菌的快速筛选,对口岸快速验放和田间监测提供了技术保障。

水稻细菌性谷枯病 病菌活菌 特异性检测磁珠

朱金国 莫瑾 章桂明 龚强 彭梓 陈盼 白雪

湖南出入境检验检疫局,长沙410004 深圳出入境检验检疫局,深圳518045

国内会议

中国植物病理学会2010年学术年会

厦门

中文

275-275

2010-07-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)