Bacillus amyloliquefaciens LL3优势小基因组构建的研究进展
本研究采用的pKSV7在30℃条件下稳定复制，42℃条件下过夜培养质粒便大部分发生丢失。采用了upp作为反向筛选标记。upp编码尿嘧啶磷酸转移酶(uracilphosphoribosyltransferase)，能够将尿嘧啶转化为UMP，从而能够使细胞利用外源尿嘧啶。5-FU是毒性的嘧啶类似物，能够被尿嘧啶磷酸转移酶转化为5-fluoro-UMPo5-fluoro-UMP之后转化为5-fluoro-dUMP，强烈抑制胸苷酸合成酶的活性，细胞生长受到抑制。ups，缺失的芽孢杆菌能够对5-FU产生抗性。在缺失upp基因的基础上，upp表达盒能够作为一个反向筛选标记。通过融合PCR将upp，上下游各500bp融合到一起，连接入pKSV7。将此重组质粒通过电转化进入LL3中，42℃过夜培养，涂布Cm平板，筛选得到质粒整合到染色体的单交换重组菌。然后撤掉Cm选择压力，传代培养24h，涂布5-FU平板。影印平板表明，在5-Fu平板上生长的菌株均为氯霉素敏感型，证明upp是一个有效的反向筛选标记，假阳性率几乎为O。
淀粉芽孢杆菌 优势小基因组 无痕敲除法 反向筛选标记
宋存江 车有 孙杨 梁配新
300071 南开大学生命科学学院 分子微生物学与技术教育部重点试验室
国内会议
成都
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14-15
2014-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）