钙结合蛋白对人牙周膜细胞增殖及炎症因子表达的影响
目的:检测钙结合蛋白与侵袭性牙周炎(AgP)的相关性，明确钙结合蛋白对牙周膜细胞生长和炎症因子表达的影响及其机制。 方法:纳入AgP患者20名，牙周健康对照者20名。对研究对象进行详细的牙周检查，记录出血指数(Bleeding index, BI)，探诊深度(probing depth, PD)，附着丧失(Attachment Loss,AL).每位研究对象选取两颗牙为实验牙，收集跟沟液样本。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测龋沟液钙结合蛋白水平。收集因正畸治疗需拔除的牙周健康的牙齿，刮取牙周膜组织培养原代人牙周膜细胞(periodontal ligament cells, PDLCs )，MTT法检测人重组钙结台蛋白(rh5100A8，rhS100A9，rh5100A8/A9)对PDLCs增殖的影响，流式细胞仪和DAPI染色检侧重组钙结合蛋白对PDLCs凋亡的影响。RealtimePCR及ELISA检测钙结台蛋白对PDLCs炎症因子表达的影响;免疫荧光方法检测细胞内NF-κB-p65的核转位。 结果:AgP患者龋沟液钙结合蛋白总量及浓度均显著高于健康对照，且钙结合蛋白水平与临床检测指标BI，PD，AL有显著正相关(P＜0.05)。较高浓度rhS100A8/A9作用48小时后抑制PDLCs的生长，而rhSI00A8和rhS100A9作用辗马;10-6M rhS100A8/A9处理PDLCs后Annexin-V阳性比例增加;钙结台蛋白导致部分PDLCs细胞核发生浓缩，着色较深而呈亮蓝色，部分细胞核破裂呈碎片状戴多边形;rhS100A8/A9处理组与对照组相比显著增加凋亡细胞的比例.rhS100A9及rh5100A8/A9处理细胞12小时后明显上调牙周膜细胞中IL-6，IL-8，TNF-α，COX2的mRNA水平(P＜0.05).其中IL-6与IL-8mRNA上调的幅度更为明显。rhS100A9诱导PDLCs培养上清中IL-6蛋白水平显著升高(p＜0.05).rhS100A9及rhS100A8/A9明显促进人牙周膜细胞中NF-κBp65由细胞质转位进入细胞核，而S100A8作用较弱。 结论:侵袭性牙周炎患者跟沟局部钙结合蛋白总量及浓度显著升高;较高浓度rhS100A8/A9抑制人牙周膜细胞的生长，促进牙周膜细胞凋亡;rhS100A9及rhS100A8/A9促进人牙周膜细胞中炎症因子的表达，其机制可能与NF-κB通路的激活相关。
侵袭性牙周炎 病理机制 钙结合蛋白 细胞增殖 炎症因子 基因表达
郑云飞
北京大学口腔医院口腔颌面外科
国内会议
2014全国口腔生物医学学术年会暨“西湖国际”口腔医学高峰论坛
杭州
中文
223-224
2014-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）