鮰爱德华氏菌外膜微孔蛋白ompN1、ompN2和ompN3基因生物信息学分析及截段基因的原核表达与其免疫原性检测
根据GenBank中鮰爱德华氏菌外膜微孔蛋白N(outer membrane porin protein,OMP)基因序列(NC_012779.2),设计引物,以鮰爱德华氏菌Ms12基因组DNA为模板,经PCR扩增后克隆至pMD19-T载体,将阳性克隆菌送公司测序.测序结果通过生物信息学软件对omp N1、ompN2和ompN3序列进行氨基酸序列分子质量和分子式、信号肽、跨膜区、亲/疏水性、B细胞表位预测,并构建系统发育树;然后根据去信号肽的B细胞表位相对集中区域,设计特异性引物,经PCR扩增后,将截段序列克隆至pMD19-T载体,鉴定成功后克隆至原核表达载体pET32a(+)并转化至BL21 (DE3)/Rosseta(DE3)i进行IPTG诱导表达,最后用兔抗鮰爱德华氏菌血清对rOmpN1、rOmpN2和rOmpN3进行免疫原性检测.结果显示扩增得ompN1(1143bp)、ompN2(1056bp)和ompN3 (1053bp)的序列,获得的基因登录号分别为KJ831564、KJ831565和KJ831566.经生物信息学分析显示,OmpN1、OmpN2和OmpN3分子武分别为C1940H2993N543O622S7、C1817H2723N497O579S5和C1896H2843N5199O563S7,分子质量大小分别为44.1kDa、40.9kDa和41.8kDa,均为含有一个信号肽和跨膜区的疏水性蛋白,具有一个革兰氏阴性细菌OM_channels超家族结构域,是一种嵌入型的膜外蛋白;SDS-PAGE电泳检测发现,诱导表达的融合重组蛋白均以包涵体的形式出现在沉淀中,大小分别约为61.8kDa、58.7kDa和59.1 kDa;Western-blot分析表明,rOmpN1、rOmpN2和rOmpN3均能与兔抗鮰爱德华氏菌全菌血清结合,表明鮰爱德华氏菌外膜微孔蛋白N具有亚单位疫苗开发的潜力.
鮰爱德华氏菌 外膜微孔蛋白N1基因 外膜微孔蛋白N2基因 外膜微孔蛋白N3基因 生物信息学 原核表达 免疫原性
潘延乐 汪开毓 王均 肖孟玮 李岚敏
四川农业大学鱼病研究中心,四川 雅安 625014;动物疫病与人类康四川省重点实验室四川农业大学,四川 雅安 625014
国内会议
苏州
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211-220
2014-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）