pVEGF165-IRES-Ang-1重组质粒双基因表达量的一致性研究

摘要：

目的：探讨pVEGF165-IRES-Ang-1重组双顺反子质粒在大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cell,MSC)中表达的情况,为下一步的动物实验奠定基础. 方法：构建插入人血管生成素-1(Angiopoietin,Ang-1)和人血管内皮细胞生长因子165(Vascular Endothelial Growth Factor 165,VEGF165)双顺反子的pIRES重组质粒,经脂质体转染大鼠MSC,以实时荧光定量PCR技术分析各基因人源、鼠源以及总mRNA的动态变化. 结果：所构建的pVEGF165-IRES-Ang-1双顺反子重组质粒在大鼠MSC中成功表达了相应蛋白.人VEGF165得以高丰度表达,且在转染ld后mRNA检出的拷贝数最高;人Ang-1在4个检测时间点中的mRNA拷贝数比较稳定,但转录本的拷贝数较VEGF165显著降低;转入人Ang-1和人VEGF165后,各对应同源蛋白的总mRNA有显著增加,但大鼠MSC自身Ang-1与VEGF164的编码mRNA明显有下调趋势. 结论：pVEGF165-IRES-Ang-1重组双顺反子质粒双基因表达量明显不一致,表现为受插入的位置关系影响,且可能受转染细胞内同源蛋白的总量调控.

关键词： 重组双顺反子质粒 基因表达 血管内皮细胞生长因子165 血管生成素-1 骨髓间充质干细胞

作者: 朱峰 刘名倬 郭光华 熊成龙

作者单位: 南昌大学第一附属医院重症医学科,江西南昌,330006 南昌大学第一附属医院烧伤科,江西南昌,330006 复旦大学公共卫生学院,上海,200032

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国医师协会创伤外科医师分会成立筹备大会、第八届全国创伤外科学术研讨会暨第二届阳明危重病急救医学论坛

会议地点: 浙江余姚

会议语种:中文

页码: 332-342

在线出版日期: 2014-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）