甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因克隆及其实时荧光RT-PCR检测
甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)引起的甘蔗黄叶病是一种新的全球性病毒病害.本文以YLSCPFl和YLSCPR591为引物,采用RT-PCR方法克隆了甘蔗黄叶病毒福建分离物(CHN-FJl)外壳蛋白(CP)基因,编码196个氨基酸.分析不同地理来源的SCYLV病毒分离物cp基因核苷酸及其推导编码的氨基酸序列,同源性达95％以上.根据cp基因的保守序列,设计l对特异性引物和TaqMan探针,建立了SCYLV的TaqMan实时荧光RT-PCR方法.结果表明,检测下限为初始质粒模板DNA 1000拷贝/μL(约3.61fg/μL),比常规PCR方法的灵敏度提高100倍.检测什蔗花叶病毒、宿根矮化病菌和黑穗病菌,没有典型的扩增曲线和无Ct值.应用实时荧光RT-PCR、常规RT-PCR和组织印迹免疫杂交(TBIA)对田间甘蔗叶片样品进行检测,阳性检出率分别为100％、61.5％和69.2％,表明该方法比常规RT-PCR和TBIA具有更高的灵敏度,适合于对SCYLV的检测.
甘蔗 黄叶病毒 外壳蛋白 克隆技术 序列分析 实时荧分子检测技术
高三基 杨帆 陈平华 王恒波 徐景升 陈如凯
福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室,福州 350002
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105-112
2014-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）