甘蔗14-3-3全长基因克隆及表达分析
目的:克隆甘蔗14-3-3基因并预测分析其编码蛋白的结构,为研究甘蔗基因功能和代谢调控机制提供参考. 方法:本文以水稻14-3-3基因为模版Blast甘蔗EST(expression sequence tag)数据库,依据序列拼接结果及RT-PCR技术获得编码甘蔗14-3-3蛋白的全长基因,并用生物信息学对该蛋白的二级、高级结构和功能活性位点进行预测. 结果:克隆得到784bp甘蔗14-3-3基因,最大开放阅读框为771bp,编码256个氨基酸,该蛋白的分子量与理论等电点分别为28.88kD和4.79.蛋白聚类分析可知,甘蔗14-3-3蛋白与水稻、高粱、玉米的同源性均达到90％以上.Cn3D V.4.1预测位于第3和第5两个二聚体上的Lys-50、Arg-57、Arg-131和Try-132组成一个凹穴,是结合靶蛋白的作用面;第60、65、188、218为的4个丝氨酸是磷酸化的活性位点.实时定量PCR检测14-3-3基因在甘蔗的不同组织中均有表达,在茎和分生组织中,14-3-3基因高丰度表达特征,可能与糖代谢和细胞分裂的调控相关;而在根中可能参与了矿物元素的吸收和代谢. 结论:成功克隆了甘蔗14-3-3基因,并预测分析其编码蛋白的结构,可用于甘蔗信号转导和基因调控等方面研究.
甘蔗 酸性二聚体可溶性蛋白 全长基因 克隆技术 编码结构
罗炼芳 孔冉 苏俊波
中国热带农业科学院南亚热带作物研究所,广东湛江 524091
国内会议
海口
中文
66-74
2014-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）