慢性阻塞性肺病患者肺泡灌洗液宏基因组DNA的制备方法
目的：从稳定期COPD患者的支气管肺泡灌洗液(BALF)标本中提取微量的宏基因组DNA,以便于后续的PCR反应和测序进行菌群分析. 方法：取3例稳定期COPD患者的BALF各Sml,13000转4℃离心30分钟收集细胞,改良QIAGEN DNA提取试剂盒的操作步骤进行提取:加入Buffer ATL后首先运用研磨珠和多功能生物样品匀质器破碎革兰氏阳性菌的菌壁,再加入蛋白酶K,55℃孵育1小时,然后加入Buffer AL振荡混匀.加入无水乙醇混匀后,将全部溶液过柱,用500μl BufferAW1洗柱一次,再加入500μl Buffer AW2洗柱一次,最后加50μl Buffer AE洗脱DNA.提取的DNA用Qubit dsDNA BR Assay Kit试剂盒定量,通过PCR方法检测样本中的细菌16S DNA含量进一步验证. 结果：改良后三例BALF的DNA浓度分别是15.5μg/ml,25μg/ml和60.8μg/ml,明显高于单纯按照试剂盒操作步骤提取的DNA浓度(1μg/ml,7.64μg/ml和42.9μg/ml),并且所提取的DNA可以很好的进行菌群16S的PCR扩增,改良后的PCR扩增产物明显多于改良前. 结论：改良后的DNA提取方法能够更高效的提取BALF中的宏基因组DNA,为进一步的测序和菌群分析打下基础.
慢性阻塞性肺病 肺泡灌洗液 脱氧核糖核酸 宏基因组
王娟 杜毅鹏 沈宁 贺蓓
100191 北京大学第三医院呼吸科
国内会议
银川
中文
1-9
2013-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）