大洋来源杂色曲霉ZBY-3的新霉素抗性突变株筛选获取及其新产活性产物研究
利用新建立的超声介导的新霉素抗性筛选方法，从原始菌株杂色曲霉ZBY-3筛选获得了30株抗性突变株，并通过抗性试验证实了突变株对新霉素的获得性抗性。利用第四、第六、第八代菌株，对原始株ZBY-3及其30株突变株分别进行了三批次相同条件下的发酵培养和提取物制备，制得了各菌株发酵物的乙酸乙醋提取物，再利用MTT法测试了这些提取物在100μg/mL浓度下对K562细胞的抑制活性。在MTT法活性测试中，ZBY3提取物对K562细胞并没有显示任何抑制活性(抑制率为1.8％)，但22株突变株样品却对K562细胞显示了明显抑制作用(IR%＞20%)，其中16株突变株样品对K562细胞的抑制率超过了40%。这些活性测试结果表明，22株突变株获得了可代谢产生抗肿瘤活性产物的代谢能力。对其中7株活性突变株及其原始株ZBY-3的乙酸乙醋提取物进行了HPLC-PDAD-UV和HPLC-ESI-MS分析，结果从7株突变株样品中均检测到了ZBY 3提取物中没有的许多小分子代谢产物，从UV和MS检测水平证实了原始株ZBY-3中沉默的有些次级代谢途径在这些突变株中得到激活，从而表达产生了相应次级代谢产物。这还从对其中一株突变株200-2003h 1-2新产活性产物的研究结果得到了进一步验证。通过与原始株ZBY-3发酵提取样品直接对照，采用活性测试与化学检测(TLC及HPLC分析)相结合跟踪的分离模式，通过追踪分离突变株新产活性代谢产物，分离阐明了突变株200-200 3h 1-2新产6个活性产物:cyclo(D-Pro-D-Phe)(1),cyclo(D-Tyr-D-Pro)(2), phenethyl 5-oxo-L-prolinate(3),cyclo(L-IIe-L-Pro)(4),cyclo(L-Leu-L-Pro)(5)和3(3,Sa,9a-trihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-then-6-one(6)。
抗肿瘤药物 杂色曲霉 新霉素抗性突变株 活性产物
董源 李长伟 崔承彬
军事医学科学院毒物药物研究所,北京 100850;解放军第三〇二医院,北京100039 军事医学科学院毒物药物研究所,北京 100850
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1-2
2014-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）