PEG-MAL修饰蛋白中硫醚键在常规电泳分析的不稳定现象
本文使用不同上样缓冲液并进行不同时问的加热变性处理后再mono-PEGylated CNTF进行SDS-PAG E分析。结果显示未经加热处理的样品，原蛋白位置处均未出现蛋白条带。在不含有或者不含有还原剂的存在下，加热处理后的样品在原蛋白位置均出现清晰的条带，揭示加热是使PEG链与蛋白分离的关键因素。并且在不含还原剂的样品中，在两倍于CNTF分了量的位置出现新的条带，而在含有还原剂的对应样品中却为观察到。表明不含还原剂的样品在加热过程中有二聚体的出现，并且这种二聚体是通过亚基问的二硫键维持的，显示在PEG与蛋白分离的过程中涉及到硫醚键的断裂。上述结果表明在使用SDS-PAG E对PEG-MAL修饰蛋白的纯度、收率甚至PEG修饰度等进行初步分析，要关注硫醚键结构的不稳定性而出现在加热下硫醚键断裂的现象可能对使用常规SDS-PAGE分析mPEG-MAL修饰蛋白产生误导，本文首次发现硫醚键在PEG-MAL修饰蛋白中的快速断裂，并证实了电泳过程中的变性加热步骤极大的加速了这种容易引起误解现象。为确保SDS-PAG E对PEG-MAL修饰蛋白的纯度、收率甚至PEG修饰度分析的准确性，mPEG-MAL修饰蛋白样品处理要避免加热或者不要超过60℃。
药用蛋白 聚乙二醇修饰 硫醚键 电泳分析 不稳定现象
张纯 刘永东 苏志国 余蓉
四川大学华西药学院,靶向药物及释药系统教育部重点实验室;四川成都 610041;中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室 北京 100190 中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室 北京 100190 四川大学华西药学院,靶向药物及释药系统教育部重点实验室;四川成都 610041
国内会议
石家庄
中文
1-2
2014-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）