比格犬IFN-α和IFN-β mRNA SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立
为检测比格犬α-和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列,分别设计合成特异性引物,以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法.通过RT-PCR分别扩增IFN-α、IFN-β和GAPDH 的基因片段,并克隆于pMD19-T载体中制备标准品,建立的荧光定量RT-PCR标准曲线.结果表明:IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102拷贝/μL～1×108拷贝/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.994.熔解曲线显示为特异单峰,组内组间变异系数均少于3％,特异性和重复性较好.同时采用常规RT-PCR方法与本研究建立的方法对30份临床样品检测,结果显示IFN-α和IFN-β的阳性符合率分别是96.43％和96.55％.本研究建立的检测方法为比格犬IFN mRNA 的定量分析提供了有效手段.
比格犬 干扰素 信使核糖核酸 实时荧光定量聚合酶链反应 检测方法
潘福星 王冬冬 曹志伟 冯培祥 刘宏 齐娟 孙忠晟 王祖荣 尹燕博
青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109 青岛澳兰百特生物工程有限公司,山东青岛 266101 青岛博隆实验动物有限公司,山东青岛 266225
国内会议
中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
银川
中文
364-372
2014-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）