比格犬α7干扰素成熟肽基因的克隆、原核表达及活性分析
本实验通过RT-PCR 的方法从比格犬的脾脏中提取基因组DNA扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因.将纯化的PCR产物克隆至pMD19-T载体,转化入感受态细胞DH5α中,经PCR检测及测序鉴定表明,所克隆的目的基因为比格犬α7干扰素成熟肽,与GenBank中登录的犬干扰素序列(NM001006654)的同源性达到100％.在此基础上构建重组原核表达质粒pET-32a-CaIFN-α7,并转化至表达宿主BL21(DE3)中.该工程菌在37℃经IPTG诱导后进行SDS-PAGE 电泳,结果表明在分子质量约38.4kD的位置出现了明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在.经凝胶分析软件Bandscan分析,表达产物约占菌体总蛋白的48.5％.用Protein Refolding Kit对包涵体进行纯化复性,结果显示重组CaIFN-α7在犬肾细胞(MDCK)上具有较高的抗病毒活性.本试验为比格犬α7干扰素的进一步生产和应用奠定了一定基础.
比格犬 α7干扰素成熟肽 基因克隆 原核表达 活性分析
潘福星 朱梅胜 冯培祥 王冬冬 范丹丹 齐娟 王祖荣 尹燕博
青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109 青岛澳兰百特生物工程有限公司,山东青岛 266101 青岛博隆实验动物有限公司,山东青岛 266225
国内会议
中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
银川
中文
372-379
2014-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）