人源全长MMP-9型基质金属蛋白酶的原核表达及活性研究

目的:原核表达MMP-9型基质金属蛋白酶,并研究其水解底物明胶的活性. 方法:利用化学合成方法合成blaMMP-9基因,经PCR扩增后克隆至pET-28a载体,构建重组的原核表达质粒pET28a-MMP-9,转化至E.coli BL21(DE3),诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,测定其水解底物活性及最适pH值和温度. 结果:重组质粒经测序证明其正确性;表达的重组蛋白相对分子量约为82.3KDa,纯化后蛋白浓度为0.5mg/mL,该酶对其底物明胶具有较高的水解活性,其最适pH值为7.5,最适温度为35℃. 结论:利用工程菌E.coli BL21(DE3)-pET28a-MMP-9成功实现了MMP-9型基质金属蛋白酶的原核表达,为深入研究其生物学功能及作用机制提供了材料.同时也为研发该酶的抑制剂提供了靶标物质.
MMP-9基质金属蛋白酶 原核表达 酶活性 最适温度 最适pH值
沈秉正 宋金春 喻研 陈姣 张伶莉 彭燕 肖宇博
武汉大学人民医院药学部,湖北 武汉 430060;中国药科大学生命科学与技术学院药物生物信息学教研室,江苏 南京 210009 武汉大学人民医院药学部,湖北 武汉 430060 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,湖北 武汉 430030 中国药科大学生命科学与技术学院药物生物信息学教研室,江苏 南京 210009
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2014-06-10(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)