Bcr启动子驱动EGFP表达转基因小鼠的制备和初步鉴定
本研究采用显微注射法制备bcr启动子启动报告基因egfp表达的转基因小鼠,在活体水平验证bcr启动子的启动特异性.首先,以慢性髓性细胞白血病细胞株K562细胞基因组为模板,PCR扩增了1.1kb bcr启动子,在扩增产物的上、下游引物加入了EcoR Ⅰ酶切位点.Ase Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切pEGFP-N1真核表达质粒载体,去除载体自身的CMV启动子,将1.1 kb bcr启动子定向克隆到EGFP绿色荧光蛋白报告基因上游,构建了pbcr-EGFP真核表达载体;重组质粒瞬时转染K562细胞和NIH3T3细胞,进行真和表达验证后,酶切回收获得目标片段,显微注射583枚受精卵,移植到30只受体鼠输卵管中,受体鼠怀孕26只,共生产首建鼠90只,经过PCR检测,4＃(♀)、36＃(♂)和81＃(♂)等3只F0代为转基因整合阳性鼠.
慢性髓性细胞白血病 bcr启动子 绿色荧光蛋白 基因表达
刘雷 王宝珠 劳荃蘅 刘民 薛整风 季明春
蚌埠医学院实验动物中心,安徽蚌埠233030 扬州大学比较医学中心,江苏扬州225009 扬州大学医学院,江苏扬州225001
国内会议
福州
中文
1-6
2014-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）