中药制剂肃毒星的体外和动物体内抗乙型肝炎病毒作用及其相关机制研究
目的:研究旨在揭示中药提取物肃毒星的体内外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用及其相关作用机制. 方法:以HepG2.2.15细胞(野生型HBV复制细胞系)和HepG2.A64细胞(恩替卡韦耐药型HBV复制细胞系)作为肃毒星抗HBV作用的体外评价模型;将携带1.3个拷贝HBV基因组信息的重组8型腺相关病毒经小鼠的尾静脉注射建立HBV小鼠体内评价模型.分别用荧光定量PCR、ELISA和免疫组化方法检测细胞HBV复制中间体和动物血清中HBV DNA水平,HBsAg和HBeAg水平和肝细胞原位HBcAg表达;用基因芯片技术分析肃毒星和恩替卡韦(ETV)药物处理HepG2.2.15细胞前后胞内基因的差异表达情况,流式细胞技术分析小鼠脾脏内T淋巴细胞的活化比例. 结果:①肃毒星(10.0 μg/mL)对HepG2.2.15细胞野生HBV和HepG2.A64细胞ETV耐药病毒复制、HBsAg、HBeAg水平的抑制率分别为75.1％、51.0％、 64.1％和65.2％、 42.9％、63.9％;ETV (10.0 μmol/L)的抑制率则分别为94.7％、36.6％、19.8％和52.7％、9.4％、14.7％.突变株对肃毒星和ETV的耐药倍数分别为1.2和712.5倍.②肃毒星组小鼠给药两周后血清HBV DNA下降1.39个Log值,HBsAg和HBeAg较给药前分别下降48.9％和51.7％;ETV组小鼠血清HBV DNA下降2.07个Log值,HBsAg和HBeAg则无明显下降.③差异表达基因KEGG通路分析发现肃毒星处理HepG2.2.15细胞后有10种差异表达倍数在2倍以上的胞内小分子蛋白参与HBV感染相关分子调节网络,抑制HBV复制,而ETV处理HepG2.2.15细胞后无相关分子的差异表达.④免疫组织化学结果显示肃毒星组小鼠HBcAg阳性的肝细胞数较对照组显著性减少.⑤流式细胞结果显示肃毒星组小鼠CD107a+CD3+CD8-,CD3+CD4+CD69+的T淋巴细胞比例较对照组显著性升高,而CD3+CD4+CD62L+的T淋巴细胞比例较对照组显著性降低. 结论:中药提取物肃毒星能在细胞和动物模型中有效抑制野生及ETV耐药HBV的复制和抗原表达,其机制涉及干扰HBV感染相关分子调节网络和活化宿主CD4+T细胞.
肃毒星 中药药理 抗乙型肝炎病毒作用
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北京,解放军302医院全军传染病研究所肝衰竭诊疗与研究中心 100039 北京金铭康生生物科技有限公司 首都医科大学附属北京鼓楼中医医院 首都医科大学公共卫生与家庭医学学院营养学教研室
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2014-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）