荧光定量RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)方法的建立
猪繁殖与呼吸障碍综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的疾病.目前PRRSV的检测方法主要是RT-PCR和ELISA,但是RT-PCR存在假阳性、灵敏度低的缺点、ELISA步骤较多检测所用时间较长.本研究通过荧光定量检测PRRSV方法的建立,为猪场提供一种快速准确的检测方法.结果:(1)通过引物浓度、反应条件优化得到了荧光定量PCR检测PRRSV反应的最适体系和条件:体系:SYBR Primix Ex TaqTM 10μL，上下引物终浓度0.5μM，模板8.5μL;反应条件95℃ 3min,40cycles;95℃ 6s,55℃ 7s,72℃ 13s;(2)建立了标准曲线Ct值=-3.323*1g拷贝数+30.898,R2=0.998线性关系良好，扩增效率E=100％。(3)灵敏度检测发现，荧光定量方法最低可以检测出102copies/μL，远大于普通RT-PCR的灵敏度。本研究建立了荧光定量的方法检测PRRSV，与普通RT-PCR相比荧光定量不需进行电泳，因此减少了PCR产物污染造成假阳性的缺点;本方法可以在3h内完成，步骤较简单，比ELISA方法用时少且成本较低。
猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光定量 反转录聚合酶链反应 检测技术
姬高升 王红宁 康润敏 张议 曾凡亚
四川大学生命科学学院,动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室,生物资源与生态环境教育部重点实验室,“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台,四川成都610064
国内会议
成都
中文
255-255
2014-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）