新一代靶向酪氨酸激酶ALK抑制剂CT-707治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的研发
目的:研发新一代较Crizotinib(克唑替尼)作用更强、能够对Crizotinib耐药和Crizotinib治疗诱导的ALK激酶突变体有高选择性抑制用的ALK激酶抑制剂用于治疗非小细胞肺癌。 方法:CT-707的设计和合成由公司内部独立完成(已经申请了专利保护)。使用酶学方法检测CT-707对对ALK, FAK和PYK2激酶的体外选择性抑制作用，通过对92个蛋白激酶的筛选，分析了CT-707对其它蛋白激酶的抑制作用。在细胞水平，一方面通过细胞增殖试验检测CT-707对ALK, FAK/PyK2高表达系生长的抑制作用。另一方面，通过蛋白印记试验和其它相关实验分析了CT-707对肿瘤细胞的生长、粘附、迁移、和凋亡，ALK/FAK/PYK2介导的蛋白质磷酸化和信号传导进行了系统的分析。同时，用三个人源性裸鼠模型研究了CT-707的体内肿瘤在生长的抑制作用，以及它的体内药物代谢特征。CT-707在动物体内的浓度，采用液相色谱/串联质谱的方法进行分析，所有分析方法均经过方法学确证。动物种属包括大鼠和犬，在口服和静脉给药后对其血浆浓度进行检测，包括单次和重复给药。 结果:研究发现CT-707对ALK激酶和它的突变体激酶的抑制活性较己被美国FDA批准并用于临床治疗ALK阳性非小细胞肺癌的Crizotinb作用更有效(IC50=3.8nM).CT-707对与肿瘤细胞的侵润性生长和转移密切相关的非受体酪氨酸激酶FAK和Pyk2(IC50<3nM)也具有显著的抑制作用。在细胞水平，CT-707和Crizotinib都对人源性肿瘤细胞系Karpas 299,SU-DHL-I和NCI-2228的生长有明显的抑制作用，CT-707对NCI-H2228以及Karpas 299细胞生长的抑制作用比分别比Crizotinib强3倍和6倍。进一步通过对ALK介导的信号传导通路的调节作用的研究发现，CT-707能够通过选择性的抑制Karpas 299肿瘤细胞ALK的自我磷酸化而抑制ALK激酶下游的基因转录调节蛋白Stat3和重要的细胞信号通路调节蛋白激酶ERK的磷酸化，从而在机理上阐述了CT-707通过靶向抑制ALK激酶介导的信号传导抑制ALK异常高表达的人源性肿瘤细胞体外的生长。在异体移植瘤模型中，CT-707比Crizotinib能够更明显地抑制人肿瘤细胞系NCI-H2228,Karpas 299和T47D在裸鼠体内的生长，并呈明显的剂量依赖关系。巧mg/kg和30 mg/kg口服连续给药11天以后，CT-707能够导致裸鼠异常高表达的人源性恶性肿瘤细胞Karpas-299,NCI-2228肿瘤组织的缩小和消失，CT-707的裸鼠最大耐受剂量250 mg/kg/天，相对于它的有效治疗剂量7.5 mg/kg/天，治疗安全指数是35倍。单剂量和多剂量药物代谢和药物动力学研究发现CT-707具有在在荷瘤鼠体内肿瘤组织高浓度分布的特点，CT-707的肿瘤生长抑制作用和血浆CT-707浓度，肿瘤组织ALK磷酸化密切相关，CT-707的血浆非蛋白质结合的药物浓度如果维持在4 nM以上或者肿瘤组织ALK磷酸化的抑制大于75％或者p-ALK/ALK小于0.25的时候，CT-707能够明显抑制人源性肿瘤细胞Kapars299在裸鼠体内的生长和导致肿瘤组织的缩小。CT-707具有良好的体外ADME特征和动物体内药代动力学性质。它在体外体内药代实验中都显示中等程度吸收，代谢和消除比较缓慢，适合一天一次的给药设计，比Crizotinib的每天两次更方便服用。CT-707代谢产物暴露量比较少，对代谢酶没有抑制或诱导作用，而Crizotinib对最主要的代谢酶3A4有抑制作用，相比较Crizotinib而言，CT-707更有利于临床联合用药。在毒性方面，CT-707在安全药理和致突变性试验中没有观察到显著毒性，而Crizotinib在安全药理和致突变性试验中均发现有显著毒性，因此CT-707在这联合用药和安全性方面较Crizotinib有优势。在一般毒性试验中发现CT-707的大鼠急毒MTD=600mg/kg,比格犬急毒MTD=1000mg/kg、大鼠4周长毒MTD=75mg/kg、比格犬4周长毒MTD=7.5mg/kg，有6倍以上的治疗安全窗口。 结论:合成和发现了一个结构新颖、用于治疗人非小细胞肺癌的新一代ALK激酶抑制剂CT-707。CT-707在分子水平、细胞水平和对人源性肿瘤在裸鼠体内的生长有优异的抑制作用，其体内药物代谢和安全性方面均明显优越于Crizotinib。
非小细胞肺癌 靶向酪氨酸激酶抑制剂 克唑替尼 临床疗效
彭勇 孙颖慧 黄园园 韩蕴琪 刘启超 孙莹 翟小峰 唐佳 赵胜 许新合 刘志华 张慧 李根 沈宇 于洪灏 王树龙 李春龙 校登明 罗鸿 韩永信 吴满刚 刘希杰 胡远东 孔凡胜 赵娜 王鹤 王欢
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国内会议
2014医学科学前沿暨第三届个体化治疗与抗肿瘤药物研究新趋向研讨会
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2014-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）