O-糖基化在酪氨酸羟化酶功能调节中的作用
目的:观察酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)0-糖基化和磷酸化水平在6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞(入神经母细胞瘤细胞)帕金森病细胞模型中的变化,探讨0-糖基化在酪氨酸羟化酶功能调节中的作用. 方法:用不同浓度的6-OHDA处理SH-SY5Y细胞,通过观察细胞形态学变化、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,了解6-OHDA导致的SH-SY5Y细胞损伤的情况,选择适当浓度的6-OHDA处理SH-SY5Y细胞作为模型.用相同终浓度的6-OHDA加上4mmol/L四氧嘧啶(O-糖基化转移酶抑制剂)处理SH-SY5Y细胞相同时间作为模型治疗组;用4mmol/L的四氧嘧啶处理SH-SY5Y细胞相同时间作为治疗对照组.提取各组培养细胞总蛋白,用Western印迹检测SH-SY5Y细胞TH的表达以及其0-糖基化和磷酸化水平的变化,采用多巴胺酶联免疫吸附测定试剂盒ELISA法检测各组细胞多巴胺的浓度. 结果:6-OHDA以浓度依赖性地引起SH-5YSY细胞存活率下降,12.5-50μmol/L 6-OHDA处理细胞24小时,细胞存活率为对照组的96.9％-72.3％;100umol/L 6-OHDA处理细胞24小时后存活率低于50％.50μmol/L 6-OHDA处理SH-SY5Y细胞24小时引起细胞TH表达的下降、糖基化水平升高和磷酸化水平下降;采用四氧嘧啶处理SH-SY5Y细胞24小时后,其THO-糖基化水平下降、磷酸化水平升高,但TH的表达无改变;用四氧嘧啶+50μmol/L6-OHDA处理SH-SY5Y细胞24小时后,与模型组比较,TH表达无明显改变,0-糖基化水平下降,磷酸化水平上升.多巴胺浓度检测的结果显示,与空白对照组比较,四氧嘧啶处理SH-SY5Y细胞24小时后,总的多巴胺的浓度升高了11.5±3.4％(P＜0.01);与模型组比较,四氧嘧啶处理后模型治疗组总多巴胺浓度升高8.7±2.0％(P＜0.01). 结论:在6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病细胞模型中,TH的O-糖基化水平升高,磷酸化水平的下降;通过抑制酪氨酸羟化酶的O-糖基化水平可以上调其活性,引起多巴胺生成分泌的增多,这一作用可能同0-糖基化与磷酸化的竞争性抑制有关.
帕金森病 酪氨酸羟化酶 功能调节 O-糖基化
丁伟
武汉市中西医结合医院
国内会议
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251-262
2014-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）