载玻片原位培养羊水细胞技术的建立和临床应用研究
目的:以载玻片为培养载体,探索载玻片上染色体核型分散的影响因素、染色体分散的质量评估体系,建立载玻片原位培养羊水细胞技术规范化流程.通过与常规塑料瓶原位培养技术同步比对研究,实现临床转化. 方法:国产载玻片与进口载玻片培养瓶同步培养10例羊水,分析细胞克隆数与有效分裂相数,检测国产载玻片贴壁性能.取40例羊水标本用国产载玻片培养,探索不同温度、湿度组合下染色体分散质量,分析羊水有核细胞数与细胞克隆数,细胞克隆数与有效分裂相数相关性.建立载玻片原位培养羊水细胞技术规范化流程.随机选择产前诊断患者100例,用自制载玻片法原位培养和塑料瓶培养法同步培养羊水细胞,进行临床检测比对试验,比对两种方法细胞贴壁成功率、细胞克隆数目、有效分裂相数及核型符合率,评价临床应用可行性. 结果:配对t检验分析经不同载玻片种类培养的细胞克隆数和有效分裂相数，细胞克隆数P=0.128(P>0.05).有效分裂相数P=0.555(P>0.05)，无统计学差异。国产载玻片获得细胞克隆数和有效分裂相数能力不亚于进口载玻片，且价格低。温度(Temperature T),湿度(Humidity，H)综合影响染色体分散质量，以T=21,H=50；T=22,H=48；T=23,H=46；T=24,H=44组合，干燥时间200～300s为佳，可获得60％～65%的有效中期分裂相用于染色体核型分析。Pearson分析胎儿有核细胞数与贴壁克隆数相关性，R=0.344。贴壁克隆数在≤40个范围内与有效分裂相成正相关，克隆数>40有效分裂相减少。国产载玻片与塑料瓶原位培养法比对试验结果显示，两者培养成功率均为100%。采用配对t检验分析，两个方法的细胞克隆数(P=0.497)，有效分裂相数(P=0.759)均无显著差异。100例羊水经两种方法同步培养，核型符合率达100%，检出正常核型95例，异常核型5例，染色体多态性改变3例，18三体1例，mos 47,XX,+7”3”/46,XX”17”1例，载玻片法可以实现临床转化。 结论:国产载玻片成功用于原位羊水培养，温度和湿度是影响染色体质量的主要因素，初步临床应用显示载玻片原位培养羊水细胞技术可以获得常规塑料瓶原位培养法同样效果，为高通量自动扫描捕获体系提供了基础技术平台，值得临床推广。
染色体疾病 产前诊断 载玻片 羊水细胞 原位培养技术 临床应用
林小玲 郑义 郑昭科 毛义建 谢番妮 李德柒 吴昊 唐少华
国内会议
第九届全国遗传病诊断与产前诊断学术交流会暨产前诊断和医学遗传学新技术研讨会
兰州
中文
169-170
2014-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）