免疫荧光检测核因子-κB活化的定量分析
目的:免疫荧光分析软件检测内毒素(LPS)诱导原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NF-κB信号通路的活化. 方法:原代分离HUVECs,随机分为6组:空白对照组(无LPS处理)、LPS刺激组(1ug/ml LPS分别刺激0.5h,1h,2h和4h),和阴性对照组(无LPS处理,无一抗处理),运用自主研发设计的免疫荧光分析软件定量分析胞浆胞核内p65蛋白定位和表达变化.蛋白质免疫印迹法(Western Blot)验证荧光分析软件结果. 结果:随着LPS刺激的时间增加肉眼荧光镜下NF-κB/p65总蛋白表达增加,核转位于2h和4h组明显;荧光分析软件检测图像结果提示,各LPS组细胞NF-κB/p65总蛋白表达上调,于4h组平均值最高,2h为NF-κB/p65核转位现象高峰点;Western blot显示的表达下降和p-IKKβ表达上调,提示LPS可诱导NF-κB信号通路的激活,NF-κB/p65蛋白随LPS刺激时间延长NF-1κB/p65总蛋白表达有增加趋势,2h稍有下降,4h表达明显升高,与荧光分析软件分析结果基本一致. 结论:LPS诱导原代HUVECs NF-κB/p65核转位高峰点为2h,自主研发的免疫荧光分析软件可协助相对定量分析荧光图片.
内毒素 原代人脐静脉内皮细胞 免疫荧光分析软件 NF-κB核因子 定量分析
修敏 何凤 娄远蕾 徐露 熊洁琦 王平 李国辉 郭菲
330006 南昌大学第一附属医院烧伤研究所;南昌大学研究生院 南昌大学研究生院 南昌大学信息工程学院电子信息工程系 330006 南昌大学第一附属医院烧伤研究所
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197-203
2014-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）