雌激素类化合物对人体肝脏CYP2C9的调控及扰乱机制研究
目的:分析雌激素类化合物通过何种通路调控或扰乱CYP2C9的表达并阐明其机制。 方法:人肝癌化细胞HepG2共转染雌激素受体α(ERα),Flag-Med25表达质粒或CYP2C9启动子雌激素应答元件ERE报告基因荧光素酶质粒(2C9-ERE-Luc)后，进行雌激素(雌二醇E2)、双酚A处理。通过报告基因荧光素酶活性分析、哺乳动物双杂交实验、免疫共沉淀、荧光定量PCR检测等方法分析雌激素类化合物对CYP2C9表达的影响。另外利用基因突变技术构建2C9-ERE-mut和Flag-Med25mut质粒，进一步阐明Med25-ERα-2C9三者的结合位点。 结果:ERα,Flag-Med25共转入HepG2，雌二醇E2、双酚A处理后，2C9-ERE-Luc报告基因荧光素酶活性显著上升。这表明雌二醇E2、双酚A能够调控CYP2C9的转录。通过免疫共沉淀实验、哺乳动物双杂交实验，发现E2、双酚A能激活雌激素受体ERα，活化后的ERα结合到CYP2C9启动子雌激素应答元件ERE位点，同时ERα又与桥梁蛋白Med25(LXXLL位点)结合，再通过RNA聚合酶B调控CYP2C9的表达。同时荧光定量PCR检测也证明了ERα.Med25共转入HepG2后，E2、双酚A能诱导上调CYP2C9 mRNA水平。通过基因突变技术使Med25(LXXLL位点)发生基因突变后，发现ERα与Med25不能结合，E2、双酚A也丧失了对CYP2C9的调控作用。这显示了桥梁蛋白Med25在这个调控通路中具有重要作用。 结论:首次发现雌激素类化合物(E2、双酚A)能够通过ERα-Med25通路，调控、扰乱CYP2C9的表达。通过对CYP2C9调控机制的研究，为临床合理联合用药提供重要依据。此外，以雌激素、Med25作为靶点，通过药物调控，为临床相关疾病的治疗提供新思路。同时为环境雌激素双酚A的毒作用机制研究提供科学依据。
雌激素类化合物 肝脏 药物代谢酶 表达调控 扰乱机制
张淑芸
温州医科大学环境与公共卫生学院
国内会议
杭州
中文
122-123
2014-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）