乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究

摘要：

为了探求乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主茵中不稳定遗传的影响因子,本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1 bp～2913 bp为研究对象,分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用.在5”端,分析片段中潜在的原核启动子序列,通过PCR扩增得到不同长度的cDNA片段;在3”端,通过内切酶酶切截断基因组prM蛋白或E蛋白编码区,获得3”末端不同的cDNA片段.将各片段克隆入pCRBluntⅡ-TOPO载体,转化大肠杆菌,于37℃条件下培养.结果显示,片段73 bp～2913 bp、97 bp～2913 bp、355 bp～2913 bp及1 bp～933 bp、1 bp～1275 bp能够在转化茵中稳定遗传;含有其它片段39 bp～2913 bp、54 bp～2913 bp及1 bp～1800bp、1 bp～1971bp的重组细菌不能在37℃条件下生长;片段1 bp～1600bp虽然能够在转化菌中传代,但是出现不规律突变.以上结果表明,软件所预测各原核启动子片段中,基因组73 bp至118 bp区域与cDNA克隆稳定性有关,且上游的54 bp至73 bp的序列对该区域启动子存在影响;在JEV基因组1275 bp至1600 bp之间可能存在毒性蛋白编码序列.

关键词： 猪乙型脑炎病毒 遗传不稳定性 基因克隆 潜在启动子活性区域 毒性蛋白编码序列位置

作者: 郑旭晨 郑浩 郭亦非 刘飞 梁超 童武 单同领 于海 童光志

作者单位: 中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

会议地点: 深圳

会议语种:中文

页码: 200-203

在线出版日期: 2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）