副猪嗜血杆菌部分hhdA基因的克隆及表达载体的构建

摘要：

根据GenBank中的副猪嗜血杆菌hhdA的基因序列,设计并合成1对特异性引物,采用PCR方法从分离的副猪嗜血杆菌中扩增出与预期设计大小相符的hhdA基因特异性条带,将扩增出的DNA片段回收纯化与pMD18-T载体连接,并转化感受态细胞Top10,经菌液PCR、酶切鉴定为阳性的重组茵进行测序.结果表明扩增的副猪嗜血杆菌hhdA基因大小为1809 bp,不合终止密码子的目的基因,插入位点、大小与读码框均正确.将目的基因转入原核表达载体pET-32a(+)构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-hhdA,将重组质粒转化到BL21(DE3)中,经1PTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白约80 ku.

关键词： 副猪嗜血杆菌 hhdA基因克隆 原核表达 序列分析

作者: 曾文斌 聂小伟 刘悦欣 黄冬艳 王萍

作者单位: 江西农业大学动物科技学院,江西南昌330045

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

会议地点: 深圳

会议语种:中文

页码: 229-231

在线出版日期: 2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）