猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究

摘要：

为了探索猪α干扰素(poIFN-α)与白介素-18(poIL-18)融合基因的抗病毒效果,本研究通过融合PCR,以质粒pMD1 8-T/poIFN-α和pMD18-T/poIL-18为模板扩增猪IFNα-IL18(poIFNα-IL18)融合基因.将poIFNα-IL18融合基因插入原核表达载体pET-28b(+)构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL 18,转化大肠杆茵BL21感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组表达蛋白;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化后,用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上进行抗病毒活性测定.结果表明成功构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18;SDS-PAGE可检测到相对分子质量为37 ku左右的蛋白条带,与目的蛋白大小相近;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化,获得高纯度重组蛋白;用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上检测到融合蛋白poIFNα-IL 18比单一蛋白poIFN-α和poIL-18的抗病毒活性更为显著,其抗水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)活性分别为1.03×105 U/mg、1.28×104 U/mg及0.11×104 U/mg.

关键词： 猪 α干扰素 白介素-18 融合基因克隆 原核表达 抗病毒活性

作者: 张盼盼 何静 康银峰 向斌 任涛

作者单位: 华南农业大学兽医学院,广东广州510642

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

会议地点: 深圳

会议语种:中文

页码: 249-253

在线出版日期: 2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）