ORFV-DNA Polymeras基因RNAi-siRNA片段筛选鉴定
羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的一种羊属动物接触性皮肤传染病,也是人畜共患传染病之一.根据0RFv与宿主细胞相互作用的特点，本研究选定ORFV胞内复制的关键基因DNA poiymerase为靶向基因，运用RNAi技术进行靶向基因沉默的体外试验研究。通过GenBank中注册的标准株ORFV-NZ2的mRNA序列，采用网络自动筛选平台将靶序列通过基因BLAST分析以排除siRNA非特异性抑制其它基因的可能性。在594bp~984bp的靶序列上，遴选出分值较高的3个shRNA候选片段，起始点分别为596,875和947，分别命名为D-875、D-947和D-596。按照shRNA一般构成模式为:正义链TG sen TTCAAGAGA anti CTTTTTTC (Hpa I);反义链TCGAGAAAAAAG sen TCTCTTGAA anti CA(Xho I)。其中TTCAAGAGA为发夹结构;每个片段设置Xho I和Hpa I位点。靶序列引物设计:上游引物TAAGCGATCGCGCGGCGATTCACGCTTAC(SgfI);下游弓肋TAAGCGGCCGCGATGGTCCCGTTGTTGTTG(NotI)。将合成的shRNA候选片段插入慢病毒表达载体pLL3.7,构建的重组质粒分别命名为pLL3.7-D947,pLL3.7-D875,pLL3.7-D596和pLL3.7-D。PCR鉴定结果表明，重组表达载体pLL3.7-D596为阳性重组子，可用于将siRNA转染293T细胞，其它重组子仍需进一步优化。本研究结果为进行ORFV-DNA Polymeras基因沉默的体外试验奠定了基础。
羊口疮病毒 靶向基因 核糖核酸片段 阳性重组子
于永忠 王金珍 张欣媛 李珊珊 潘求真 崔玉东
黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,黑龙江大庆163319
国内会议
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
深圳
中文
385-385
2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）