抗HER2抗体CDR3结构域与力达霉素融合蛋白的构建及其活性初探
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,占女性肿瘤死亡首位,其发病率逐年增高,人们迫切需要采用新的治疗方法来提高患者的生存率及生存质量.分子靶向治疗在肿瘤治疗中的地位逐渐上升,成为肿瘤治疗的一个热点.目前已有多种分子靶向治疗的药物应用于乳腺癌的治疗或正在临床试验阶段,如赫赛汀(Herceptin)、细胞周期调节蛋白抑制剂、环氧化酶-2(COX-2)抑制剂、蛋白激酶C(PKC)抑制剂等.赫赛汀(Herceptin)是人源化的HER2胞外段单克隆抗体,代表着治疗女性HER2阳性转移性乳腺癌的重大突破.然而抗体药物的分子量过大，并且人源化不完全问题，也可能导致药物免疫原性的增加。为了降低可能发生的免疫原性并增强药物的主动靶向运输，在原有实验的基础上，本实验选择了6种以HER2为靶点的单克隆抗体重链CDR3区，通过柔性连接头GGGGS与力达霉素辅基蛋白(LDP)连接，构建、表达、纯化了两个多结构域单靶点的人工多结构域蛋白DL和HL。利用间接ELISA法检测融合蛋白DL,HL对肿瘤细胞MCF-7,SKOV3,SKBR3等细胞的免疫反应性;利用FITC标记DL和HL蛋白，检测DL,HL与肿瘤细胞表面蛋白的结合能力。ELISA结果表明:DL,HL对MCF-7,SKOV3,SKBR3等细胞的亲和力与LDP的亲和力基本一致，增加CDR3区后不能改善LDP对各肿瘤细胞的亲和力。而免疫荧光实验也得到相同的结论，均未见DL,HL与LDP的亲和特性有显著性差异。实验结果表明，通过将针对同一靶点的不同抗体的重链CDR3区通过基因工程的方法进行融合，不能很好的保持抗体的亲和力，这有可能是抗体的结构域是一个共同作用，多结构域共同参与的过程，单一结构域不能完整具备抗体的亲和特性。
乳腺癌 分子靶向治疗 抗乳腺癌预后判断因子抗体 结构域 力达霉素融合蛋白
胡磊 钟根深 甄永苏
中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所,北京,100050
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2013-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）