MMP9基因3”UTR多态性与动脉粥样硬化性脑梗死相关性及miRNA-491介导的多态调控机制研究
目的:动脉粥样硬化是缺血性脑卒中最常见病理变化,高表达的细胞外基质金属蛋白酶9(MMP9)在促进动脉粥样硬化形成以及斑块破裂的过程中发挥了重要的作用.研究发现microRNA能够靶向识别靶基因3”UTR特异序列,在转录后水平对生物体基因表达起到精细调节的作用.因此,本文旨在探讨MMP9基因3”UTR SNPs与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)的相关性以及miRNA-491介导的MMP9多态性调控机制. 方法:采用病例-对照研究,利用聚合酶链反应(PCR)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对MMP9基因3”UTR五个SNPs(rs20544、rs1056628、rs1802908、rs2664517和rs9509)进行基因分型检测,探讨MMP9 3”UTR SNPs与ACI的关系.构建了MMP9基因3”UTR野生型和突变型(rs1056628A→C)重组表达质粒以及mir-491表达质粒,共同瞬时转染HUVC细胞,运用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测荧光强度,了解靶序列碱基改变前后miRNA对靶基因识别结合的情况.为明确mir-491介导多态调控模式下MMP9表达水平的改变,合成miRNA491-5p模拟物和阻遏物,与MMP9基因野生型和突变型细胞株共转染HUVC,分别运用RT-PCR和ELISA检测方法从转录和翻译水平来检测MMP9的表达. 结果:1.中国湖南地区汉族人群中存在MMP9基因rs20544、rs1056628和rs9509多态性,未发现rs1802908及rs2664517位点多态性.2.MMP9基因rs1056628位点AA、AC、CC基因型频率在ACI组和对照组分别为0.594/0.332/0.074,0.709/0.262/0.029;A/C等位基因频率分别为0.760/0.240,0.840/0.160,两组间基因型及等位基因频率分布存在统计学差异(P<0.05),ACI组中C等位基因频率和CC基因型均显著高于对照组(P<0.05).3.MMP9基因rs20544位点CC、CT、TT基因型频率在ACI组和对照组分别为0.471/0.405/0.124,0.489/0.382/0.129;C/T等位基因频率分别为0.674/0.326,0.680/0.320,两组间等位基因频率及基因型分布比较无统计学差异(P>0.05).4.MMP9基因rs9509位点TT、TC、CC基因型频率在ACI组和对照组分别为0.491/0.418/0.091,0.466/0.447/0.087;T/C等位基因频率分别为0.700/0.300,0.689/0.311,两组间等位基因频率及基因型分布比较无统计学差异(P>0.05).5.成功转染重组表达质粒,与野生型组比较,突变型组重组质粒相对荧光素酶表达活性有显著增高(P<0.05),说明靶基因SNP改变可能降低了mir-491对其识别结合的能力.6.mir-491不影响MMP9 mRNA的表达水平,但与野生型组相比较,突变组组蛋白表达水平明显增高(P<0.05). 结论:1.MMP9基因SNPs rs1056628多态可能是中国湖南汉族人群ACI的危险因素.2.rs1055628与ACI相关的机制可能是MMP9基因3”UTR区域rs 1056628A→C多态影响了mir-491对靶基因的识别结合能力,从而减弱了对MMP9 mRNA翻译的抑制作用,导致了MMP9蛋白表达的增高.
动脉粥样硬化性脑梗死 细胞外基质金属蛋白酶9 非编码单链核糖核酸-491 调控机制
袁梅 詹琼 段晓梅 杨期东 夏健
中南大学湘雅医院神经内科 410008
国内会议
中国康复医学会脑血管病专业委员会换届暨第十五次全国脑血管病康复学术年会、湖南省康复医学会神经康复专业委员会2012学术年会
长沙
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294-295
2012-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）