秦川肉牛ADIG基因过表达重组腺病毒载体的构建

摘要：

本文旨在构建秦川肉牛ADIG基因的重组腺病毒载体,为下一步研究该基因在秦川肉牛脂肪细胞中表达,进而研究该基因在脂肪细胞分化过程中的分子机制和相关信号通路.根据NCBI收录的牛的mRNA(NM_001113720.1)设计引物,通过RT-PCR和PCR扩增获得目的基因,将其连接pMD19-T simple Vector并测序正确.质粒提取纯化后,通过BglⅡ与salⅠ双酶切,然后胶回收酶切产物,将其连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上并线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.coli Bj5183感受态细胞进行同源重组,并用pacⅠ酶切鉴定,提取质粒后转化E.coli Top10进行扩繁.将测序结果与NCBI上收录的序列相比对,CDS区完全匹配,说明成功构建ADIG基因的重组腺病毒表达载体pAd-ADIG,可用于下一步的病毒包装。

关键词： 秦川肉牛 ADIG基因 过表达水平 腺病毒 载体构建 同源重组

作者: 张琼 姜碧杰 咎林森

作者单位: 国家肉牛改良中心,杨凌中国712100 国家肉牛改良中心,杨凌中国712100;西北农林科技大学动物科技学院,杨凌中国712100

会议类型: 国内会议

会议名称: 第二届中国肉牛选育改良与产业发展国际研讨会暨中国畜牧兽医学会养牛分会八届二次学术研讨会

会议地点: 陕西杨凌

会议语种:中文

页码: 560-564

在线出版日期: 2013-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）