NGF依赖的TF-1亚克隆细胞株的筛选及应用
目的:获得NGF依赖的TF-1亚克隆细胞株用于重组人神经生长因子生物学活性的测定.方法:首先,采用逐步适应法将rhGM-CSF依赖的TF-1细胞驯化为mNGF依赖的TF-1细胞;其次,利用半固体培养基对NGF依赖的TF-1细胞进行克隆化,镜下挑选单克隆细胞扩大培养并测定各单克隆细胞株对NGF的剂量-效应反应曲线,筛选出对NGF反应良好的TF-1单克隆细胞株,并对其中最优的单克隆细胞株进行STR图谱分析;第三,使用筛选获得的亚克隆细胞株,对检测方法的各项参数进行优化后检测rhNGF生物学活性.结果:经过驯化,GM-CSF依赖的TF-1细胞株可以只在mNGF存在下正常生长,并对NGF的刺激呈现良好的量效关系.对驯化后的TF-1细胞进行了两次克隆化,共挑选出50个单克隆转入96孔板进行扩增,最后获得15株单克隆细胞株.利用mNGF,测定并绘制了这15株TF-1亚克隆细胞株的剂量-效应曲线,筛选得到l株对NGF反应性最好的TF-1亚克隆细胞株A2,命名为TF-1-A2株.经过STR图谱分析,该细胞呈现特征性STR图谱,不存在与其他细胞的交叉污染现象,另外该细胞仅在CSFlPO位点与ATCC TF-1细胞数据不完全相同,可判定为TF-1细胞.经优化后该细胞株对重组人NGF也具有良好的反应性,可用于重组人NGF生物学活性的检测.结论:成功筛选得到l株对NGF具有良好反应性的TF-1-A2亚克隆细胞株,该细胞株可用于定量检测NGF生物学活性.
红白血病细胞 神经生长因子 生物活性测定 亚克隆细胞株筛选
霍立红 乐伟 史权威 李曼 何景昌 刘荷中
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2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）