Vimentin,、CTGF和AQP5在烟尘诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞恶性转化模型中的表达
目的:观察波形蛋白(Vimentin)、结缔组织生长因子(conective tissue growth factor,CTGF)和水通道蛋白5(Aquaporin5,AQP5)在烟尘诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)恶性转化模型中的表达.方法:以永生化ATⅡ(RLE-6TN 细胞株)为实验对象,分为高剂量染毒组、低剂量染毒组和空白对照组.高、低剂量染毒组分别使用终浓度为200、50mg/L的烟尘悬浊液在第1、3、5、7、9代对细胞染毒,同代对照组不加烟尘悬浊液同步培养.从第10代起,高、低剂量染毒组常规传代直至软琼脂克隆形成实验呈阳性.采用透视电镜观察细胞超微结构,流式细胞术观察细胞周期,免疫印迹法及免疫组织化学观察各组细胞肺表面活性蛋白SP(-B)、SP-C、Vimentin、CTGF、AQP5蛋白的表达.结果:从形态改变上,发现染毒24h后即可观察到烟尘对RLE-6TN细胞超微结构造成损伤,主要表现为板层小体变性且数量减少,以及细胞凋亡坏死;转化后的细胞由圆形或类圆形铺路石样生长变为长梭形.高、低剂量染毒组细胞培养至25代时软琼脂克隆形成检测实验均呈阳性,克隆形成率分别为3.33‰和1.66‰;继续培养至35代观察高、低剂量染毒组克隆形成率分别为12.50‰和10.00‰,空白对照组始终没有克隆形成.高、低剂量染毒组克隆形成率与染毒培养代数相关性有统计学意义(P＜0.01),但与烟尘染毒水平相关性无统计学意义(P＞0.05).流式细胞学检测示高、低剂量染毒组G2/M期+S期的比例较空白对照组增高.免疫细胞化学示高、低剂量染毒组第30代细胞CTGF阳性、SP-B阴性,空白对照组CTGF阴性、SP-B阳性.Westernblot示高、低剂量染毒组第25、30、35代细胞SP-C、Vimentin和AQP5均为阴性,而空白对照组SP-C阳性,Vimentin和AQP5均为阴性.结论:云锡炼厂烟尘中可导致ATⅡ恶性转化且CTGF表达阳性.
肺肿瘤 肺泡Ⅱ型上皮细胞 恶性转化 肺表面活性蛋白 结缔组织生长因子 波形蛋白 水通道蛋白5 发病机制
唐莹 边莉 孟庆印 金克炜 阮永华
昆明医科大学电子显微镜室,云南昆明 650500 昆明医科大学第一附属医院病理科,云南昆明 650031 昆明医科大学附属肿瘤医院病理科,云南昆明 650032 昆明医科大学病理系,云南昆明 650500
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2014-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）