鉴别猪伪狂犬病毒强弱毒的高效纳米PCR检测试剂盒及初步应用
目的:建立了鉴别猪伪狂犬病毒(PRV)强弱毒高效纳米PCR检测方法,并对相关条件进行优化,组装了试剂盒.方法:根据PRV保守序列设计引物,建立纳米PCR检测PRV强弱毒方法,进行敏感性、特异性试验,试剂盒的组装及评估试验.结果:特异性试验表明本试剂盒对于PRV能够扩增出431(gB)、316(gE)和202bp(gG)的目的片段,对于PRV-Bartha-K61能够扩增出431和202bp的目的片段,其他对于猪捷申病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、非洲猪瘟病毒等均未扩增出条带,敏感性试验表明纳米PCR方法比常规PCR方法敏感100-1000倍,最低核酸拷贝数检出量可以达到101copy/μL数量级.利用两种不同方法对攻毒小鼠检出时间的比较试验结果显示,纳米PCR可以在第3天检测到病毒核酸,而普通PCR在第4天才能检出.试剂盒的批内、批间检测结果无明显差异,稳定性良好.-20℃至少可保存12个月.在对中国黑龙江、吉林等7个省份的临床送检的110份样品进行检测,检测结果显示PRV强毒阳性率为53％,阴性率为47％,未发现有弱毒感染.结论:鉴别PRV强弱毒纳米PCR试剂盒的研制,对PRV感染的早期检测、野毒株和疫苗株的鉴别、疾病控制等都有重要意义,而且也可以用于其他动物PRV感染的检测和早期诊断.
猪伪狂犬病毒 纳米PCR技术 检测试剂盒 效果评估
马兴杰 仇铮 崔宇超 崔尚金
中国农科院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨 150001
国内会议
郑州
中文
229-233
2013-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）