UPLC-PDA法测定白芍灌胃大鼠后血浆中的芍药苷成分及其对胶原诱导性关节炎大鼠的影响
目的:采用超高效液相色谱法对白芍汤剂中的有效成分芍药苷的含量进行测定,并检测大鼠经白芍灌胃后血浆中芍药苷的吸收,并以芍药苷作为干预因素,探讨其对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的影响.方法:(1)采用超高效液相色谱(UPLC)-PDA法,色谱柱为:UPLCBEHC18色谱柱(2.1×50mm,1.7μm),流动相:乙腈(A2)和1％醋酸水(B2),流速:0.25mL/min,检测波长:190-480nm,对白芍汤剂中芍药苷的含量进行测定,并用白芍汤剂灌胃SD大鼠,采用UPLC-PDA法检测大鼠血浆中芍药苷成分;(2)采用牛Ⅱ型胶原蛋白混合完全弗氏佐剂的方法诱导SD大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)动物模型.模型成功后随机分为芍药苷低中高三个剂量组和模型对照组,用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)筛选芍药苷最佳剂量干预CIA大鼠.动态观察芍药苷干预后CIA大鼠一般情况、体重增长数、关节炎指数积分、足爪肿胀度、关节X线摄片及关节滑膜组织病理学改变,并用ELISA同步检测正常组、模型组和芍药苷组大鼠血清IL-1β、TNF-α水平.结果:(1)在不足4min内,白芍汤剂中的芍药苷成分获得良好分离.灌胃白芍汤剂30min后健康SD大鼠的血浆中可测出芍药苷成分.(2)根据ELISA分析结果选择芍药昔中剂量浓度(1mg/kg.d)干预CIA大鼠.干预后模型组与芍药苷组关节炎指数积分于21天左右达高峰,芍药苷组在35天和42天发病程度明显轻于模型组(P＜0.05);关节X线摄片示芍药苷组大鼠关节周围软组织肿胀程度较模型组减低,关节骨骼破坏程度较模型组明显减弱;HE染色病理学检查显示模型组可见大量血管翳形成,炎性细胞浸润,滑膜增厚等病理特征;治疗组可见少量新生血管及炎症细胞浸润,滑膜轻度增厚;模型组和治疗组血清IL-1β、TNF-α水平较正常组明显升高,但治疗组在第28天血清IL-1β、TNF-α水平较模型组稍有降低,第42天治疗组血清IL-1β、TNF-α含量较模型组显著降低.结论:超高效液相色谱法能简单、快速、灵敏、有效地测定白芍汤剂中的芍药苷含量,并发现白芍汤剂有效成分芍药苷为大鼠血浆可吸收的有效成分.芍药苷可以显著提高大鼠对类风湿关节炎的耐受性,能够降低炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的水平,抑制胶原诱导性关节炎大鼠的炎症反应与骨质侵蚀,为进一步研究芍药苷治疗类风湿关节炎的机制奠定基础.
胶原诱导性关节炎 白芍灌胃治疗 超高效液相色谱 芍药苷成分 药理作用
熊新贵 吴丹 祝皓 梁清华 陈疆
湖南长沙湘雅医院
国内会议
西安
中文
327-328
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）