鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
根据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白(NSP2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立了鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)检测方法;进行了二重FQ-PCR检测方法的敏感性、特异性和重复性实验,并对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与HP/LP-PRRSV二重RT-P CR方法进行了对比实验.结果显示:成功建立了鉴别HP/LP-PRRSV的二重FQ-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈现阳性反应曲线,而对5个对照病原扩增曲线均呈现阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92％,较二重RT-PCR方法阳性检出率高.
猪繁殖与呼吸综合征 高致病性病毒 低致病性病毒 二重荧光定量反转录聚合酶链反应 临床诊断
吴志明 闫若潜 孔刚锐 李文山 赵明军 王东方 赵雪丽 陈慧娟 靳利粉
河南省动物疫病预防控制中心 郑州河南450008 鹤壁市动物疫病预防控制中心,河南鹤壁,458030
国内会议
郑州
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481-485
2013-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）