荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-L1 mRNA方法的建立
目的:本研究为建立荧光定量RT-PCR检测猪PD-1及其配体PD-L1 mRNA的方法。方法:根据GenBank中猪PD-I和PD-L1的基因序列，分别设计2对特异性引物，PCR扩增目的基因片段，回收与pMD18-T连接后转化DH5α，提取重组质粒，作为标准品，制备标准曲线，并进行特异性、重复性和应用性检测。结果:标准曲线PD-1和PD-L1两个样品相关系数R2分别为0.997和0.998，均大于0.99，线性关系好，扩增效率分别为86.03％和102.40％;溶解曲线出现狭窄单一峰，荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，出现单一目的条带，无引物二聚体，特异性强;检测PD-1和PD-L1组间的变异系数分别为0.592％和0.847％，重复性好;应用性结果表明，正常猪外周血单核细胞中PD-1和PD-L1的基因表达水平稳定，该检测方法的稳定性好。结论:本试验建立了实时荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-L1基因表达量的方法。本研究建立的荧光定量RT-PCR检测PD-1和PD-Ll的基因表达模式，为进一步研究猪免疫抑制性传染病如CSF、PRRS感染后，PD-1和PD-L1的表达模式奠定基础，从而进一步丰富猪免疫抑制性传染病引起的免疫抑制机理。
猪 免疫抑制 程序性死亡分子1 程序性死亡分子1配体 荧光定量反转录聚合酶链反应
王选年 岳锋 朱艳平 张艳芳 孙国鹏 李鹏 银梅 杨媛
新乡学院,生物技术研究中心,生命科学与技术系,河南新乡,453003;河南科技学院,动物科学学院,河南新乡,453003 新乡学院,生物技术研究中心,生命科学与技术系,河南新乡,453003;四川农业大学,动物医学院,四川雅安,625000 新乡学院,生物技术研究中心,生命科学与技术系,河南新乡,453003 河南科技学院,动物科学学院,河南新乡,453003
国内会议
郑州
中文
595-595
2013-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）