表达HPV16 E7的重组减毒单增李斯特菌的构建及免疫应答分析
目的:本研究旨在构建稳定分泌表达LLO-E7融合蛋白的重组减毒单增李斯特菌(LM),并分析重组菌诱导的特异性免疫应答能力,从而为研发宫颈癌疫苗提供新的思路,也为单增李斯特菌疫苗载体的广泛应用奠定基础.方法:首先,PCR扩增LM溶血素基因hly的上下游片段及人乳头瘤病毒(HPV)16型E7基因,Soeing PCR将3个片段拼接成融合片段,连接至pKSV7载体,将重组质粒转化至LM感受态中,利用同源重组技术将HPV16 E7抗原定点整合至单增李斯特菌基因组hly的信号肽下游,然后从基因水平及蛋白水平分析重组菌的E7表达,最后通过酶联免疫斑点试验(ELI SPOT)、细胞毒性T淋巴细胞杀伤试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定重组减毒单增李斯特菌诱导的特异性免疫应答.结果: PCR扩增及Western blot结果显示构建的重组菌能够稳定分泌表达具有活性的LLO-E7融合蛋白;ELISPOT结果显示,重组菌LM4△hly::E7诱导机体脾淋巴细胞分泌IFN-γ细胞数显著高于IL-4,表明重组菌诱导的免疫应答以Th1型免疫为主;同时LM4△hly::E7能够诱导强烈的E7特异性CTL杀伤活性,杀伤率可达到72％,与对照组相比,差异极显著(P＜0.01); ELISA检测LM4△hly::E7免疫小鼠血清中的E7抗体效价为1∶400.结论:以上研究结果表明重组减毒单增李斯特菌LM4△hly::E7能够诱导机体产生E7特异性的细胞免疫应答和体液免疫应答,为重组菌的抗肿瘤作用提供理论依据,有望成为抵抗宫颈癌的候选疫苗株,同时显示出减毒李斯特菌作为疫苗载体具有广阔的应用前景.
宫颈癌疫苗 重组减毒单增李斯特菌 人乳头瘤病毒16型E7基因 融合蛋白 免疫应答
贾艳艳 殷月兰 焦新安 程相朝 张春杰 李银聚 吴廷才 丁轲
扬州大学,江苏省人兽共患病学重点试验室,江苏扬州225009;河南科技大学,动物疫病与公共安全重点实验室 河南洛阳471003 扬州大学,江苏省人兽共患病学重点试验室,江苏扬州225009 河南科技大学,动物疫病与公共安全重点实验室 河南洛阳471003
国内会议
郑州
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611-611
2013-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）